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学术分享 | 生物药研发关键发现：抗药抗体（ADA）样本稳定性的“真相”

发布时间:

2025-06-18

在生物药的研发中，抗药抗体（ADA）的检测就像“安全哨兵”——它能预警药物引发的免疫原性反应，直接影响药物的安全性评估和疗效判断。但临床样本从患者采血到实验室检测，可能经历长途运输、反复冻融、长期储存等挑战。

真实ADA样本的稳定性如何？

在生物药的研发中，抗药抗体（ADA）的检测就像“安全哨兵”——它能预警药物引发的免疫原性反应，直接影响药物的安全性评估和疗效判断。但临床样本从患者采血到实验室检测，可能经历长途运输、反复冻融、长期储存等挑战。例如：偏远地区样本可能需要持续冷链且至少3天才能送达实验室，期间若冷藏失效、可能经历室温暴露；部分研究样本可能需要储存10年以上；检测过程中可能需要多次解冻样本进行复测。
问题来了：这些“非理想”条件会破坏ADA吗？两项最新研究用真实临床样本揭开了谜底。

研究一：抗胰岛素抗体的“抗压测试”（诺和诺德，2024）

主角：76例糖尿病患者的血清样本（含抗胰岛素抗体），最长储存6.3年。结论：以2/3样本的前后测量值的差异是否＜30%为接受标准（以ISR接受标准为参考），样本在室温22℃，冰箱4℃，4次冻融，干冰速冻4小时，以及6.3年-20℃的储存条件下，ADA样本均稳定。测试场景，细节见下：
短期稳定性室温（22℃）3天：将50 μL样本与100 μL 375 mM乙酸（pH = 2.5）混合，在室温下以50转/分钟低速振荡1小时，解离药物-ADA复合物后进行检测。结果显示，12例样本中仅1例低滴度样本（2.8%结合率）波动稍大（+35.7%），其他样本差异绝对值均＜30%。冰箱（4℃）2周：所有样本复测值波动＜25%，高滴度样本（如46%结合率）复测误差＜10%。干冰速冻4小时：模拟紧急运输条件，样本信号与新鲜样本一致（如结合率43.3% → 42.1%，-2.8%差异）。
长期稳定性-20℃冰箱存放6.3年：三组样本（储存2.7 ~ 6.3年）复测与基线的线性回归斜率0.917，R² = 0.936，仅23%低滴度样本因检测灵敏度出现波动（如结合率11.4% → 16.3%）。反复冻融4次：21例样本中4例（19%）差异＞30%，但均为假阳性升高（如11.3% → 17.6%），无降解证据（p = 0.95，Wilcoxon秩和检验）。
方法细节补充酸预处理：通过375 mM 乙酸（pH = 2.5）解离药物-ADA复合物，确保检测的是游离抗体，避免药物干扰。放射性免疫分析（RIA）：使用放射性标记的胰岛素（抗原）与样本中的抗体结合，以%结合率（%B/T）表示滴度，灵敏度可达1% ~ 5% B/T。统计方法：采用Wilcoxon秩和检验评估组间差异，结果显示不同储存条件下的样本稳定性无显著差异（α = 0.05）。
注：1）本研究中的结合率可类比常见方法中的滴度或S/N。2）复测误差以T0 作为分母计算。

研究二：多类生物药抗药抗体的“极限挑战”（礼来，2025）

主角：26例接受不同生物药治疗的患者样本（含双抗、单抗等），最长储存10年。结论：以测试样本和原样本差异是否超出30%为标准，样本在37℃，16次冻融，以及10年-80℃的条件下，ADA样本均稳定。稳定性测试，细节见下：
高温稳定性37℃（接近人体体温）2周：130例样本中7例（5.4%）差异＞30%，主要为低滴度血浆样本（如信号噪声比从40 → 80，+100%），可能与基质蛋白降解相关。延长到4周：所有样本差异＜28%，高温未引发系统性抗体失活（R² = 0.965，线性回归）。
冻融 16次-80℃冰箱反复冻融16次：每次循环包括在-80℃冷冻至少2小时，然后在室温下解冻30分钟。所有样本差异＜30%，高滴度样本（如1:20,480滴度）复测仍在检测允许范围内（±1个稀释度）。
超长期冷冻-80℃存10年：复测滴度与原始结果在±2倍稀释度内，跨批次试剂变异＜15%（n = 26，p = 0.87，t检验）。

讨论

共同点：基质是ADA的“天然保护罩”，未稀释的临床样本比实验室合成的质控品更稳定。推测是血清中的白蛋白和IgG形成保护性微环境、抑制抗体聚集和降解。
给实验室的操作建议作为生物分析实验室科学家，如何利用这些稳定性数据安排工作？
样本管理胰岛素项目：短期储存室温3天或冰箱2周内的样本直接测，无需急冻；长期储存普通-20℃冰箱足够，冻融不超过4次。生物药项目：短期储存37℃运输不超过3天，优先考虑4℃冷藏；长期储存必须-80℃；冻融最多8次。
检测“避坑”技巧所有样本先“酸浴”处理（如0.1 M甘氨酸-HCl，pH = 2.0），破坏药物-抗体复合物，避免假阴性。低滴度样本（如＜10%结合率）测3次，2次阳性才算真阳性，避免仪器波动误导结果。
合规性讨论截至目前，美国FDA对于ADA样本稳定性并无明确规定。然而，对于一线实验人员，稳定性信息又是重要的信息之一。因此，总结与对比更多的ADA稳定性实验及其结果则显得尤为重要，也期待随着越来越多的稳定性数据得以积累，监管机构未来可以给出明确的指导意见。
结语：从“过度保护”到“科学信任”这两项研究颠覆了“ADA脆弱易降解”的固有认知，证明血清中的抗体比我们想象中更稳定；对行业而言，意味着更低的冷链成本和更高效的研发流程。未来，随着更多数据积累，我们期待监管与实验室共同建立“基于风险”的样本管理标准，让科学证据驱动操作优化，而非“一刀切”的保守规则。
参考文献
[1]. Helene Solberg, Christina Bartholdy, Lone Hummelshoj Landsy, et al. Stability of anti-drug antibodies in human serum samples[J]. J Immunol Methods. 2024:525:113616.[2]. Parul Sirohi, Kelly Hainline, Heather BullockSirohi, et al. Stability of Anti-Drug Antibodies Against Antibody Therapeutics[J]. AAPS J. 2025 Feb 15;27(1):45.
本文适合生物药研发、免疫原性检测实验室及监管从业者参考，不构成实操建议，读者操作需结合具体项目要求及现行各监管机构要求开展。本文由康维讯生物科学家翻译整理，读者如发现任何差异，应以原文为准。

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