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学术成果 | 制备抗体Fab片段方法开发亮相华人抗体协会墙报展示

发布时间:

2023-05-15

开发一种用于生物分析检测的从全长单克隆抗体中制备Fab/F(ab’)2片段的方法

成果亮相华人抗体协会

华人抗体协会（The Chinese antibody society）是一个非营利、非政府的公益性组织，是第一个也是目前唯一一个全球性华人抗体专业组织。协会侧重关注治疗性抗体，并致力于创建一个全球性平台，以促进在治疗性抗体研发，生产以及商业化等领域的合作与交流。华人抗体协会于2023年5月14日在美国Cambridge/Boston召开年会，经过多年积累和发展，华人抗体协会每年的年会已经成为业内同仁交流的一次盛会。为进一步增进同行交流，拓展参会形式和渠道，2023年华人抗体协会年会新增Poster Presentation墙报展示环节。本次年会共收到近七十篇研究成果的投稿，稿件内容涵盖抗体药物开发、生产、临床、人工智能（AI）等各方面话题。通过协会摘要评审委员会8位评审委员的多轮评选，最终有20篇入选墙报展示，其中，以题为“Development of a method for producing Fab/F(ab’)2 fragments from a full-length monoclonal antibody for bioanalytical assays”的方法开发成果首次亮相华人抗体协会墙报展示，参加年会的读者朋友可在年会现场进行观摩交流。此外，还有近15篇摘要连同上述入选墙报展示成果均将在华人抗体协会旗下期刊Antibody Therapeutics以增刊（supplemental issue）的形式进行发表。

成果分享

Development of a method for producing Fab/F(ab’)2 fragments from a full-length monoclonal antibody for bioanalytical assays
开发一种用于生物分析检测的从全长单克隆抗体中制备Fab/F(ab’)2片段的方法

基于酶联免疫吸附试验（ELISA）已广泛应用于治疗性抗体药物的抗药抗体（ADA）检测，尽管全长的药物抗体分子常被作为关键试剂，但在某些情况下，需要使用抗体片段作为试剂以避免干扰。例如，人源化或全人源治疗性抗体在诸多方面与患者体内产生的ADA没有区别，尤其是抗体的Fc段。当ADA检测方法以抗人源Fc抗体作为侦测试剂时，全长的抗体药物由于也含有人源Fc段而不能直接作为捕获试剂，此时可以使用Fab片段代替全长的抗体药物。为了建立ADA检测的ELISA夹心法试验，我们开发了一种制备抗体片段的酶解方法，以获得单价Fab片段或双价F(ab’)2片段，使得抗人源Fc抗体能够作为侦测试剂用于ELISA法测定人血清中ADA的方法开发（图1）。

胃蛋白酶通常将抗体酶解消化获得F(ab’)2片段和许多Fc片段的小肽；木瓜蛋白酶主要产生两个Fab片段和一个Fc片段；而IdeS免疫球蛋白酶则在抗体铰链区下方位点酶解，产生F(ab’)2片段和1/2Fc片段。

我们将酶解消化产物包被于96孔板上，使用山羊抗人Fab-HRP和小鼠抗人Fc-HRP侦测抗体进行检测，胃蛋白酶有效地酶解IgG并产生F(ab’)2片段，而Fc段似乎被降解成更小的片段（图2）；木瓜蛋白酶和IdeS蛋白酶均可酶解获得Fab片段和Fc片段（数据未展示）。

进一步，我们基于ELISA法对Fab/F(ab’)2片段的活性进行评估，利用胃蛋白酶消化IgG1-λ（一个抗IFN-γ的单克隆抗体）以获得酶解产物。包被靶点蛋白（IFN-γ，1.0 μg/mL）、孵育酶解产物、并使用侦测抗体（抗人Fab和Fc抗体，1：20,000）进行检测（表1）。在最优的酶解条件下，所有蛋白酶的有效回收率均可达到90.0%以上。

我们的结果为Fab/F(ab’)2片段制备提供了一种实用的方法。使用胃蛋白酶消化IgG1和IgG4可制备出F(ab’)2片段并降解Fc片段。尽管木瓜蛋白酶和IdeS蛋白酶可获得效率相似的Fab/F(ab’)2片段，但需要额外的试验步骤去除Fc片段。不同的抗体药物可能适用于不同的蛋白酶和酶解消化条件，在最优的酶解条件下有效回收率均可达到90%以上。我们开发的制备方法广泛适用于多种治疗性抗体药物，即这些Fab/F(ab’)2片段可作为ADA检测方法的捕获试剂（图3）。

关于康瑞佰欧

温州康瑞佰欧生物技术有限公司（以下简称“康瑞佰欧”）由顶尖生物分析专家创立，依托国科温州研究院雄厚的科研与技术实力，秉承“让天下没有难做的分析方法”初衷，专注于高端分析仪器、高值耗材以及试剂的研发、生产与销售，旨在打造高度自动化、高灵敏度分析检测的解决方案。成立以来，公司通过不断的技术创新和产品升级，已累积多款性能优良的特色产品，涵盖分析实验室所需的仪器设备、高端耗材与试剂，致力成为生物分析实验室的一站式产品提供商。总部设立于浙江温州的研发中心是康瑞佰欧的创新引擎，汇聚了行业内的专业人才和先进的研发与生产设备，生产车间顺利通过ISO9001质量管理体系认证。康瑞佰欧聚焦电化学发光分析平台、细胞分选平台、智能实验室自动化平台、智能健康检测产品的开发，旨在破除行业痛点，成为赋能生物医药研发、医疗服务行业相关领域的全球知名企业。

成立以来，康瑞佰欧已获评2022年温州市「全球精英创新创业大赛总决赛一等奖」、2023年北京市「国科大杯创新创业大赛分项赛一等奖、总决赛二等奖」、2023年温州市龙湾区、2024年温州市「领军型人才创业项目」、2025年入选浙江省「顶尖人才创业项目」、2025年入选浙江省「科技型中小企业」。

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